生化分析儀常用分析方法

      生化分析儀常用分析方法共有三大類，分別為終點(diǎn)法、固定時(shí)間法和動(dòng)力學(xué)法。

     終點(diǎn)法： 指經(jīng)過一段時(shí)間的反應(yīng)，反應(yīng)達(dá)到平衡，由于反應(yīng)的平衡常數(shù)很大，可認(rèn)為全部底物（被測物）轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物，反應(yīng)液的吸光度不再變化，只與被測物的濃度有關(guān)。這類方法通常稱為“終點(diǎn)”法，更確切地說應(yīng)稱“平衡”法。

單試劑單波長終點(diǎn)法：t1時(shí)刻加入試劑（體積為V），t2刻加入樣本

（體積為S），然后攪拌并反應(yīng)，之后開始測量反應(yīng)液的吸光度，

在t3時(shí)刻反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)，t3－t2為測定時(shí)間。

    反應(yīng)度R＝At3－At2-1×V/（V＋S），或R＝At3－ARBLK。

    其中： Ati為i時(shí)刻的吸光度，ARBLK為試劑空白吸光度。

單試劑雙波長終點(diǎn)法： 基本上同“單試劑單波長終點(diǎn)法”，只是對于每一個(gè)測定周期，其實(shí)際吸光度等于Aλ1－Aλ2。

雙試劑單波長終點(diǎn)法：t1時(shí)刻加入第一試劑（體積為V1），t2時(shí)刻加入                                      樣本（體積為S）之后立即攪拌，t3時(shí)刻加入第二試劑（體積為V2）                                               并立即攪拌，t4時(shí)刻反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)。t3-t2為孵育時(shí)間,t4-t3為測定時(shí)間。

在項(xiàng)目參數(shù)中，如果反應(yīng)起始時(shí)間設(shè)為0，則反應(yīng)度R=A時(shí)刻吸光度-雙試劑空白吸光度。    如果反應(yīng)起始時(shí)間小于0，則反應(yīng)度R=At4 -雙試劑空白吸光度-t3到t2間設(shè)定點(diǎn)的吸光度×（V1＋S）/（V1＋S＋V2）。

雙試劑雙波長終點(diǎn)法： 基本上同“雙試劑單波長終點(diǎn)法”，只是對于每一個(gè)測定周期，其實(shí)際吸光度等于Aλ1－Aλ2。

固定時(shí)間法：又稱為一級動(dòng)力學(xué)法、二點(diǎn)動(dòng)力學(xué)法等，指在一定的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，反應(yīng)速度與底物濃度的一次方成正比，即v=k[S]。由于底物在不斷的消耗，因此整個(gè)反應(yīng)速度在不斷的減小，表現(xiàn)為吸光度的變化越來越小。這類反應(yīng)達(dá)到平衡的時(shí)間很長，理論上可以在任意時(shí)間段進(jìn)行監(jiān)測，但由于血清成份復(fù)雜，反應(yīng)剛啟動(dòng)時(shí)反應(yīng)較復(fù)雜，雜反應(yīng)較多，必需經(jīng)過一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反應(yīng)期。

t1時(shí)刻加入試劑（體積為V），之后測量試劑空白的吸光度，t2時(shí)刻加入樣本（體積為S），t3時(shí)刻反應(yīng)穩(wěn)定，t4時(shí)刻停止對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測；t2－t3為延遲時(shí)間，t3－t4為測定時(shí)間。

單波長反應(yīng)度（單雙試劑相同）：R=At4—At3

雙波長反應(yīng)度：R=（t4時(shí)刻主波長吸光度－t4時(shí)刻次波長吸光度）-－（t3時(shí)刻主波長吸光度－t3時(shí)刻次波長吸光度）

動(dòng)力學(xué)法：又稱零級動(dòng)力學(xué)法，指反應(yīng)速度與底物濃度的零次方成正比，也就是與底物濃度無關(guān)。因此，在整個(gè)反應(yīng)過程中，反應(yīng)物可以勻速地生成某個(gè)產(chǎn)物，導(dǎo)致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（ΔA/min）與被測物的活性或濃度成正比。動(dòng)力學(xué)法也被稱為連續(xù)監(jiān)測法；主要用于酶活性的測定。

    實(shí)際上，由于底物濃度不可能足夠大，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，底物消耗到一定程度后，反應(yīng)速度不再為零級，因此，零級動(dòng)力學(xué)法是針對于特定時(shí)間段而言的；同樣，由于血清成份復(fù)雜，反應(yīng)剛啟動(dòng)時(shí)反應(yīng)較復(fù)雜，雜反應(yīng)較多，必需經(jīng)過一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反應(yīng)期，各試劑商對這兩段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定。

t1時(shí)刻加入試劑（體積為V），t2時(shí)刻加入樣本（體積為S），t3時(shí)刻反應(yīng)穩(wěn)定，tn時(shí)刻停止對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測；t3-t2為延遲時(shí)間，tn-t3為測定時(shí)間。 單波長反應(yīng)度（單雙試劑相同）R＝（n∑AT－∑A∑T）/［n∑T2－（∑T）2］,其中：n＝t3到tn間的數(shù)據(jù)個(gè)數(shù) ，T＝時(shí)間 ， A=某一時(shí)間的吸光度。雙波長反應(yīng)度基本同單波長，只是某一時(shí)間的吸光度等于主波長吸光度減去次波長吸光度。