[摘要】研究了翻袋式
離心機(jī)在VB 細(xì)胞收集上的應(yīng)用,比較了同批次的VB 發(fā)酵液應(yīng)用板框過濾機(jī)與翻袋式
離心機(jī)過濾收集菌絲細(xì)胞過程中的濾速、濾餅含水量和濾液透光率等指標(biāo),目的在于考察摸索發(fā)酵液中細(xì)胞收集的新技術(shù)手段,以提高生產(chǎn)效率、收率和濾液質(zhì)量。試驗(yàn)結(jié)果表明,用翻袋式離心機(jī)處理VB。拔酵液可以提高過濾速度和濾液透光濾,同時(shí)降低濾餅含水量。
[關(guān)鍵詞】翻袋式離心機(jī);VB 拔酵液;細(xì)胞收集
[中圖分類號(hào)】TQ 051.8+4;R 977.2\'2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B [文章Jgl~"]1003-5095(2004)04-0045-02
丙酸菌厭氧法是目前國內(nèi)生產(chǎn)VB。:的主要方法之一,生產(chǎn)過程中從發(fā)酵液中收集細(xì)胞采用板框過濾。由于發(fā)酵液粘稠且成分復(fù)雜,存在濾速慢、收率低、雜質(zhì)包埋、批次間差異大等問題,是制約VB :生產(chǎn)水平提高的主要因素。德國海因克爾公司生產(chǎn)的翻袋式離心機(jī)具有分離因數(shù)高、運(yùn)行平穩(wěn)可靠的優(yōu)點(diǎn),主要用于終端產(chǎn)品的過濾分離。但用于細(xì)胞分離方面未見報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)對(duì)這種離心機(jī)用于VB :細(xì)胞收集進(jìn)行了研究。
1 材料與試驗(yàn)方法
1.1 材料
VB :發(fā)酵液(由河北中潤(rùn)制藥有限公司提供);去離子水;其他試劑為分析純。濾布。
1.2 儀器設(shè)備
翻袋式離心機(jī)(直徑300 mln,德國海因克爾公司);高效液相色譜儀(安捷倫一1100)、紅外水分天平(德國沙多利斯);電子天平(梅特勒一AX 205);秒表;量筒等。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法及操作
1.3.1 方法
將VB :發(fā)酵液計(jì)量體積,用翻袋式離心機(jī)過濾收集細(xì)胞,將細(xì)胞破壁檢測(cè)VB :含量以計(jì)算過濾收率。
1.3.2 操作步驟
檢查離心機(jī)確認(rèn)完好后裝好濾布。取處理好的發(fā)酵液精確計(jì)量體積并測(cè)定VB :含量。開啟翻袋式離心機(jī)。在轉(zhuǎn)速2 500—3 000 r/rain下緩慢加入VB 拔酵液,收集濾液填入離心機(jī)至濾液完全澄清透明。連續(xù)加入發(fā)酵液,離心至無濾液流出。降低轉(zhuǎn)速,緩慢加水浸洗濾餅,提高轉(zhuǎn)速甩至無濾液流出。
低速轉(zhuǎn)動(dòng)下將離心機(jī)的濾袋推出,提高轉(zhuǎn)速甩出濾餅收集,停機(jī)。計(jì)量濾餅重量。同時(shí)收集濾液,計(jì)量濾液體積。分別送樣測(cè)VB :含量及濾餅含水量。連續(xù)處理5批,與同批次生產(chǎn)中板框過濾進(jìn)行比較。全過程記錄每步操作時(shí)間,試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算濾速、收率。
1.4 檢驗(yàn)方法
1.4.1 精密稱取收集的VB :細(xì)胞,水解破壁用氰化鈉轉(zhuǎn)化,以高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。色譜柱:C 。5 m,250 rain,流動(dòng)相:乙腈2%磷酸二氫鈉緩沖液=20:80,保留時(shí)間6.4 min。
1.4.2 精密稱取收集的VB :細(xì)胞,用紅外水分天平稱重后紅外加熱至恒重,記錄加熱前后重量。
1.5 計(jì)算方法
收率=(濾餅中VB :含量×濾餅重量)/(發(fā)酵液中VB :含量x發(fā)酵液體積)
濾餅含水量=(加熱恒重前濾餅重量一加熱恒重后濾餅重量)/加熱恒重前濾餅重量
2 結(jié)果
2.1 收率
用翻袋式離心機(jī)處理濾液與生產(chǎn)中板框過濾的同批次發(fā)酵液比較收率結(jié)果,如表1所示。

2.2 濾速
用翻袋式離心機(jī)處理濾液與生產(chǎn)中板框過濾的同批次發(fā)酵液比較收率結(jié)果,如表2所示。

2.3 含水量
用翻袋式離心機(jī)處理濾液與生產(chǎn)中板框過濾的同批次發(fā)酵液比較收率結(jié)果,如表3所示。

3 結(jié) 論
用翻袋式離心機(jī)收集發(fā)酵液與生產(chǎn)上采用的板框過濾相比,不僅可以簡(jiǎn)化操作、降低勞動(dòng)量、改善操作條件,而且濾速和收率都略有提高;殘液量大大降低,有利于下一步操作;批次間差異很小,解決了濾速波動(dòng)造成的收率降低和進(jìn)度滯后,使規(guī)范化生產(chǎn)成為可能。因此,翻袋式離心機(jī)在VB。:細(xì)胞收集上優(yōu)于板框過濾,可用于工業(yè)生產(chǎn)。開辟了細(xì)胞收集方式工業(yè)化的新思路。