翻袋式離心機(jī)在VB2細(xì)胞收集上的應(yīng)用研究

[摘要】研究了翻袋式離心機(jī)在VB 細(xì)胞收集上的應(yīng)用，比較了同批次的VB 發(fā)酵液應(yīng)用板框過濾機(jī)與翻袋式離心機(jī)過濾收集菌絲細(xì)胞過程中的濾速、濾餅含水量和濾液透光率等指標(biāo)，目的在于考察摸索發(fā)酵液中細(xì)胞收集的新技術(shù)手段，以提高生產(chǎn)效率、收率和濾液質(zhì)量。試驗(yàn)結(jié)果表明，用翻袋式離心機(jī)處理VB。拔酵液可以提高過濾速度和濾液透光濾，同時(shí)降低濾餅含水量。 
　　[關(guān)鍵詞】翻袋式離心機(jī)；VB 拔酵液；細(xì)胞收集
　　[中圖分類號(hào)】TQ 051．8+4；R 977．2\'2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B [文章Jgl~"]1003-5095(2004)04-0045-02
　　丙酸菌厭氧法是目前國內(nèi)生產(chǎn)VB。：的主要方法之一，生產(chǎn)過程中從發(fā)酵液中收集細(xì)胞采用板框過濾。由于發(fā)酵液粘稠且成分復(fù)雜，存在濾速慢、收率低、雜質(zhì)包埋、批次間差異大等問題，是制約VB ：生產(chǎn)水平提高的主要因素。德國海因克爾公司生產(chǎn)的翻袋式離心機(jī)具有分離因數(shù)高、運(yùn)行平穩(wěn)可靠的優(yōu)點(diǎn)，主要用于終端產(chǎn)品的過濾分離。但用于細(xì)胞分離方面未見報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)對(duì)這種離心機(jī)用于VB ：細(xì)胞收集進(jìn)行了研究。
　　1 材料與試驗(yàn)方法
　　1．1 材料
　　VB ：發(fā)酵液(由河北中潤(rùn)制藥有限公司提供)；去離子水；其他試劑為分析純。濾布。
　　1．2 儀器設(shè)備
　　翻袋式離心機(jī)(直徑300 mln，德國海因克爾公司)；高效液相色譜儀(安捷倫一1100)、紅外水分天平(德國沙多利斯)；電子天平(梅特勒一AX 205)；秒表；量筒等。
    1．3 實(shí)驗(yàn)方法及操作
    1．3．1 方法
    將VB ：發(fā)酵液計(jì)量體積，用翻袋式離心機(jī)過濾收集細(xì)胞，將細(xì)胞破壁檢測(cè)VB ：含量以計(jì)算過濾收率。
    1．3．2 操作步驟
    檢查離心機(jī)確認(rèn)完好后裝好濾布。取處理好的發(fā)酵液精確計(jì)量體積并測(cè)定VB ：含量。開啟翻袋式離心機(jī)。在轉(zhuǎn)速2 500—3 000 r／rain下緩慢加入VB 拔酵液，收集濾液填入離心機(jī)至濾液完全澄清透明。連續(xù)加入發(fā)酵液，離心至無濾液流出。降低轉(zhuǎn)速，緩慢加水浸洗濾餅，提高轉(zhuǎn)速甩至無濾液流出。
    低速轉(zhuǎn)動(dòng)下將離心機(jī)的濾袋推出，提高轉(zhuǎn)速甩出濾餅收集，停機(jī)。計(jì)量濾餅重量。同時(shí)收集濾液，計(jì)量濾液體積。分別送樣測(cè)VB ：含量及濾餅含水量。連續(xù)處理5批，與同批次生產(chǎn)中板框過濾進(jìn)行比較。全過程記錄每步操作時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算濾速、收率。
    1．4 檢驗(yàn)方法
    1．4．1 精密稱取收集的VB ：細(xì)胞，水解破壁用氰化鈉轉(zhuǎn)化，以高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。色譜柱：C 。5 m，250 rain，流動(dòng)相：乙腈2％磷酸二氫鈉緩沖液=20：80，保留時(shí)間6．4 min。
    1．4．2 精密稱取收集的VB ：細(xì)胞，用紅外水分天平稱重后紅外加熱至恒重，記錄加熱前后重量。
    1.5 計(jì)算方法
    收率=(濾餅中VB ：含量×濾餅重量)／(發(fā)酵液中VB ：含量x發(fā)酵液體積)
濾餅含水量=(加熱恒重前濾餅重量一加熱恒重后濾餅重量)／加熱恒重前濾餅重量
    2 結(jié)果
    2．1 收率
    用翻袋式離心機(jī)處理濾液與生產(chǎn)中板框過濾的同批次發(fā)酵液比較收率結(jié)果，如表1所示。
                 
    2．2 濾速
   用翻袋式離心機(jī)處理濾液與生產(chǎn)中板框過濾的同批次發(fā)酵液比較收率結(jié)果，如表2所示。
                
    2．3 含水量
    用翻袋式離心機(jī)處理濾液與生產(chǎn)中板框過濾的同批次發(fā)酵液比較收率結(jié)果，如表3所示。
               
    3 結(jié) 論
    用翻袋式離心機(jī)收集發(fā)酵液與生產(chǎn)上采用的板框過濾相比，不僅可以簡(jiǎn)化操作、降低勞動(dòng)量、改善操作條件，而且濾速和收率都略有提高；殘液量大大降低，有利于下一步操作；批次間差異很小，解決了濾速波動(dòng)造成的收率降低和進(jìn)度滯后，使規(guī)范化生產(chǎn)成為可能。因此，翻袋式離心機(jī)在VB。：細(xì)胞收集上優(yōu)于板框過濾，可用于工業(yè)生產(chǎn)。開辟了細(xì)胞收集方式工業(yè)化的新思路。